蛋白质定量

✍ dations ◷ 2024-12-22 14:26:47 #蛋白质定量

布拉德福蛋白质定量法（Bradford protein assay）（中文名称为“考马斯亮兰法”）为一种利用光谱学技术分析溶液中蛋白质浓度的技术。本定量法会受待测氨基酸序列影响，此方法为Marion M. Bradford（英语：Marion M. Bradford）医生所开发。布拉德福蛋白质定量法为一种利用比色法测定蛋白质浓度的化验法。考马斯亮蓝G-250在酸性环境下，会从红色型态转为蓝色型态，并与蛋白质紧密结合。在形成这个复合物的过程中会经历两种反应：红色态的考马斯亮蓝会先将其自由电子丢给蛋白质的可电离区，造成蛋白质构型改变，并暴露其疏水性区段。于是蛋白质的三级结构会以凡得瓦力与染剂结合。此外，染剂中的负电区会与蛋白质中的正电区相互结合，与蛋白质结合的考马斯亮蓝会因此稳定其蓝色构型，造成溶液颜色改变，此时即可利用光谱仪来测量此变化。与蛋白结合之后的染料，在一段时间（2 分钟到 1 小时）之内，其吸收光谱图在 595 nm 处有一个最大吸收峰。染料在与蛋白结合前，以阳离子形态存在，显红色或者绿色；与蛋白结合之后，染料分子的阴离子形态被稳定，显蓝色。染料的吸收光谱在 595 nm 处的吸收峰的增加，正比于结合了蛋白质的染料分子数目，故也正比于样品中蛋白质的数目（浓度）。布拉德福蛋白质定量法与其它测量蛋白的方法不同，不容易受到蛋白质中其它化学成分的影响。此蛋白质分析法会受几种洗涤剂和中性盐的干扰，如SDS，Triton。结果也取决于所分析蛋白质中氨基酸的种类。其他替代蛋白质化验法还有：

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