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蛋白质定量
✍ dations ◷ 2025-04-26 13:12:38 #蛋白质定量
布拉德福蛋白质定量法(Bradford protein assay)(中文名称为“考马斯亮兰法”)为一种利用光谱学技术分析溶液中蛋白质浓度的技术。本定量法会受待测氨基酸序列影响,此方法为Marion M. Bradford(英语:Marion M. Bradford)医生所开发。布拉德福蛋白质定量法为一种利用比色法测定蛋白质浓度的化验法。考马斯亮蓝G-250在酸性环境下,会从红色型态转为蓝色型态,并与蛋白质紧密结合。在形成这个复合物的过程中会经历两种反应:红色态的考马斯亮蓝会先将其自由电子丢给蛋白质的可电离区,造成蛋白质构型改变,并暴露其疏水性区段。于是蛋白质的三级结构会以凡得瓦力与染剂结合。此外,染剂中的负电区会与蛋白质中的正电区相互结合,与蛋白质结合的考马斯亮蓝会因此稳定其蓝色构型,造成溶液颜色改变,此时即可利用光谱仪来测量此变化。与蛋白结合之后的染料,在一段时间(2 分钟到 1 小时)之内,其吸收光谱图在 595 nm 处有一个最大吸收峰。 染料在与蛋白结合前,以阳离子形态存在,显红色或者绿色;与蛋白结合之后,染料分子的阴离子形态被稳定,显蓝色。染料的吸收光谱在 595 nm 处的吸收峰的增加,正比于结合了蛋白质的染料分子数目,故也正比于样品中蛋白质的数目(浓度)。布拉德福蛋白质定量法与其它测量蛋白的方法不同,不容易受到蛋白质中其它化学成分的影响。此蛋白质分析法会受几种洗涤剂和中性盐的干扰,如SDS,Triton。 结果也取决于所分析蛋白质中氨基酸的种类。其他替代蛋白质化验法还有:
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