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桑格试剂
✍ dations ◷ 2025-04-25 09:34:38 #桑格试剂
1-氟-2,4-二硝基苯又称2,4-二硝基氟苯,在蛋白质分析中又称为桑格试剂,是一个测定多肽N-端氨基酸的试剂。它最初由弗雷德里克·桑格于1945年发现。可以由氟化钾晶体在常温下的硝基苯溶液中与2,4-二硝基氯苯反应,由自己的氟原子取代2,4-二硝基氯苯中的氯原子来制取。这种物质可以连接上氨基,生成稳定的黄色物质2,4-二硝基苯氨基酸(DNP-氨基酸)。如果是一条肽链,则只能连接上链的一端,生成亮黄色的DNP-多肽或DNP-蛋白质,这个反应称为桑格反应(Sanger reaction)。由于DNP与氨基结合牢固,不易被水解,因此当DNP-多肽被酸完全水解以后,原来的N-端氨基酸成为黄色的DNP-氨基酸。DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯或乙醚等有机溶剂,所以可以用乙酸乙酯或乙醚对其抽提后进行色谱分析,再以标准的DNP-氨基酸作为对照,就可鉴定出此氨基酸的种类。桑格当初确定出胰岛素两条链的N-端氨基酸就是用的这个方法。
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