詹姆斯顿大屠杀（又名“1622年印第安人大屠杀”，Jamestown Massacre）发生在北美弗吉尼亚殖民地的詹姆斯顿，时间是1622年3月22日，基督受难日。这次事件因印地安波瓦坦族（Powhatan Confederacy）的酋长奥普查纳坎奴（英语：Opechancanough）（Opechancanough）指挥的一连串偷袭活动引起，共造成347人丧生，约合当时在詹姆斯顿英国人的三分之一。
詹姆斯顿是英国于1607年最早在北美开发成功的殖民地，也是当时英属弗吉尼亚的首府。事件发生之前，尽管在最后时刻少数居民接到了疏散通知，但很多居民在詹姆斯河岸被杀，从河的上下游及两岸无一幸免，被害者不分男女老幼，屋舍被烧，作物被毁。
附近最早建立的社区之一亨里库斯（Henricus）在协同攻击中首当其冲，屠杀过后横尸遍野。伍尔斯滕霍姆镇（Wolstenholme Towne）是死亡人数最高的地区之一，位于詹姆斯顿下游7英里处，位置相当在马丁亨德来德（Martin's Hundred）附近，现属于卡特葛洛夫农场（Carter's Grove Plantation），最近的考古发掘出很多遗址。
第一次盎格鲁 - 波瓦坦战争（英语：First Anglo-Powhatan War）（First Anglo-Powhatan War，1609年至1613年）结束后，瓦汗森纳卡克（Wahunsonacock）酋长的小女儿宝嘉康蒂（Pocahontas）与殖民者约翰·罗尔夫在1614年联姻，使原住民部落和英国移民间的进入了一段相对和平的时期。1618年瓦汗森纳卡克酋长去世之后，他的异母弟奥普查纳坎奴继任酋长。为了报复战争末期Pamunkey战士失败的进攻，他计划毁灭英国移民部落。1622年春，酋长的谋士Nemattanew被英人杀害，奥普查纳坎奴对詹姆斯河沿岸的至少31个英国殖民地和农场发动了突然袭击。
在发动攻击前，一位原本被指派行刺其雇主、名为Chanco的原住民男孩，在夜晚时告知他的雇主李察·派斯（Richard Pace）将有生命危险，于是派斯一家从住处横渡詹姆斯河，提醒对岸的维吉尼亚殖民地首府詹姆斯顿的人防备。但一些较远的地区没有接到任何预警。
在突袭期间，许多原为詹姆斯顿前哨的小社区被攻击，包含亨里库斯中刚为教育印弟安及殖民者孩童开设的学校。在马丁亨德来德超过一半的居民在伍尔斯滕霍姆市政中心被杀害，攻击过后仅余两座屋舍及部分教堂残留地面。近四百名殖民地居民（约占白种族群的三分之一）被杀害，二十多名妇女被掳为印第安的奴隶，部分在那里死去、部分数年后被赎回。
原住民见攻击结束后数月英人仍没有反应，以为殖民者将记取这次损失的教训，不再忽视包哈坦部落的力量，也不再破坏彼此的协议和挑起冲突。其实文化差异使他们错估了英人殖民者和他们幕后支持者的思惟。
3月22日的进攻摧毁了许多移民的春季作物，也使得许多移民居住区完全废弃。这次攻击不只是在殖民地、也导致英国国内长时间留下了印地安人是野蛮人的印象，多年来由宝嘉康蒂等所建立，对印地安人及其文化的赏识之情也都被抵消。在詹姆斯顿的前哨基地亨里库斯（Henricus），一所规划好的为印地安孩童和移民子女建立的学院和新市镇一起胎死腹中。直到70多年后，翰瑞克教区（Henrico Parish）的教区长詹姆斯·布莱尔牧师将建立威廉-玛丽学院（威廉与玛丽学院）成功地提交给英皇，并得到了皇家签发的特许执照，重新建立这样一所学校的努力才算有了结果。显然，新学校不能冒遭受另一次毁灭性打击的风险，在1693年，新校址定在距离詹姆斯顿数英里远的普兰特逊中部（中央种植园），一个充分加强防卫的地方。数年以后，殖民地的首府搬迁到那里，并改名为弗吉尼亚州威廉堡市。
在此次屠杀中存活下来的殖民者对部落展开报复式的攻击，针对部落的庄稼收成进行破坏，终于在1622年的夏天酋长奥普查纳坎奴绝望的要求进行和平协商，通过和殖民者亲善的印地安中间人开始进行。但部分詹姆斯顿的领导者由William Tucker上尉及John Pott（英语：John Pott）带领在协商仪式里配食物的饮酒中下毒，约有两百名印地安人死于毒杀其余五十人则被手刃，最后酋长奥普查纳坎奴仍逃脱。
维吉尼亚于两年后1624年正式被英格兰视为英国海外领土。这项改变意味着英国皇权可直接下达命令不必再透过弗吉尼亚伦敦公司。皇室可取得原由维吉尼亚公司所图的殖民地收益。和其他殖民地一样，占领者专注于剥削，漠视文化资产或是宝嘉康蒂等人的努力，殖民地不停扩张，和当地人约后毁约也成常态，更加挫败了部落族群。
相较于1644年再度发生的盎格鲁─包哈坦战争（英语：Anglo–Powhatan Wars#Second Anglo-Powhatan War）虽然有将近五百名英国殖民者死亡但比率上不到当时白种人口的十分之一，对殖民者来说冲击相对的小。这次战争中年事已高，连行动都需要年轻人掺扶的奥普查纳坎奴酋长被俘并监禁在詹姆斯顿，后来被一位看守他的守卫所杀。
奥普查纳坎奴的死也象征著一度强盛的包哈坦部落终于完全凋零，群族不是由原领地撤离就是被殖民者溶合，少部分还留在维吉尼亚稀少的印地安保留居，就算是这些保留区也随着白种人口的扩张不断被侵吞。
目前在维吉尼亚确认有七个印地安部落保留区是属于原本的包哈坦部落，其中Pamunkey 及Mattaponi是最久的两个，都座落在隶属于威廉王县的同名河岸边，不过实际上部落本身是独立的。
