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Northern印迹法
✍ dations ◷ 2025-04-04 04:54:37 #Northern印迹法
Northern印迹法(英语:Northern blot),又称 RNA 印迹法,是分子生物学、生物化学中常用的实验方法,通过探测样品中的RNA(或隔离的mRNA)来研究基因表达。利用探针侦测由凝胶电泳分离出来的RNA片段,寻找含有特定序列的RNA片段。与Southern印迹法相似,RNA样品经过凝胶电泳后会按照大小分离,然后将样品从凝胶转印到膜上,并用与目标序列互补的标记的探针来探测。实验结果可以根据所用探针的不同,以多种方式来观察,但大多数都显示的是样品中被探测的RNA条带的相对位置,也就是分子大小;而条带的强度则与样品中目标RNA的含量相关。这一方法可以测量目标RNA在不同样品中的情况,因此已经被普遍用于研究特定基因在生物体中表现的时刻和表现量,也是这类研究中最基本的手段。发明者是史丹佛大学的James Alwine和乔治•斯塔克(George Stark)在1977年发明,其名字是源于第一种印迹技术,Southern印迹法(命名者为Edwin Southern),两者很相似,与Southern印迹法主要的不同是Northern印迹法探测的是RNA分子,而不是DNA分子。与Southern印迹法相似,胶体可以选用琼脂凝胶或是聚丙烯酰胺凝胶,被检测物是RNA,“探针”(probe)是与目标序列互补的RNA、DNA序列或是寡核苷酸,但是探针至少要有25个碱基对与目标序列互补。RNA样品通常以含甲醛的琼脂凝胶电泳来分离,甲醛作为RNA变性剂,将RNA的二级结构变性成一级结构。凝胶内用溴化乙锭(EtBr)染色,可在UV光下观察到RNA样品的品质、大小。实验大至分为铸胶、跑胶、转渍、北方杂合反应等几个部分。
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