Northern印迹法

✍ dations ◷ 2024-07-08 04:26:48 #Northern印迹法

Northern印迹法（英语：Northern blot），又称 RNA 印迹法，是分子生物学、生物化学中常用的实验方法，通过探测样品中的RNA（或隔离的mRNA）来研究基因表达。利用探针侦测由凝胶电泳分离出来的RNA片段，寻找含有特定序列的RNA片段。与Southern印迹法相似，RNA样品经过凝胶电泳后会按照大小分离，然后将样品从凝胶转印到膜上，并用与目标序列互补的标记的探针来探测。实验结果可以根据所用探针的不同，以多种方式来观察，但大多数都显示的是样品中被探测的RNA条带的相对位置，也就是分子大小；而条带的强度则与样品中目标RNA的含量相关。这一方法可以测量目标RNA在不同样品中的情况，因此已经被普遍用于研究特定基因在生物体中表现的时刻和表现量，也是这类研究中最基本的手段。发明者是史丹佛大学的James Alwine和乔治•斯塔克(George Stark)在1977年发明，其名字是源于第一种印迹技术，Southern印迹法（命名者为Edwin Southern），两者很相似，与Southern印迹法主要的不同是Northern印迹法探测的是RNA分子，而不是DNA分子。与Southern印迹法相似，胶体可以选用琼脂凝胶或是聚丙烯酰胺凝胶，被检测物是RNA，“探针”(probe)是与目标序列互补的RNA、DNA序列或是寡核苷酸，但是探针至少要有25个碱基对与目标序列互补。RNA样品通常以含甲醛的琼脂凝胶电泳来分离，甲醛作为RNA变性剂，将RNA的二级结构变性成一级结构。凝胶内用溴化乙锭(EtBr)染色，可在UV光下观察到RNA样品的品质、大小。实验大至分为铸胶、跑胶、转渍、北方杂合反应等几个部分。

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