酶联萤光原位杂交

✍ dations ◷ 2024-12-22 17:16:21 #实验室技术

酶联荧光原位杂交(catalyzed reporter deposition fluorescent in situ hybridization，CARD-FISH，直译为催化报告沉积荧光原位杂交)，是荧光原位杂交(FISH)的一种变形，可以更有效地增加信号强度，避免背景干扰。

在通常的FISH中，核酸探针被荧光分子直接标记；而在CARD-FISH中，探针与辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase, HRP)相连。完成杂交后，洗去游离的探针，加入和荧光标记的tyramide和过氧化氢，将荧光连接在有探针结合的细胞的蛋白质上。这样，一个探针可以将很多荧光分子沉积在细胞内，起到放大信号的作用，因此比普通的FISH更为敏感。

但由于辣根过氧化物酶比普通荧光分子要大得多，无法通过细胞膜，因此实验中必须对细胞做通透性处理。这样对于具有不同外围结构的细胞，通透性会相差很大并影响信号强弱。

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