酶联萤光原位杂交

✍ dations ◷ 2025-06-29 07:22:02 #实验室技术

酶联荧光原位杂交(catalyzed reporter deposition fluorescent in situ hybridization,CARD-FISH,直译为催化报告沉积荧光原位杂交),是荧光原位杂交(FISH)的一种变形,可以更有效地增加信号强度,避免背景干扰。

在通常的FISH中,核酸探针被荧光分子直接标记;而在CARD-FISH中,探针与辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase, HRP)相连。完成杂交后,洗去游离的探针,加入和荧光标记的tyramide和过氧化氢,将荧光连接在有探针结合的细胞的蛋白质上。这样,一个探针可以将很多荧光分子沉积在细胞内,起到放大信号的作用,因此比普通的FISH更为敏感。

但由于辣根过氧化物酶比普通荧光分子要大得多,无法通过细胞膜,因此实验中必须对细胞做通透性处理。这样对于具有不同外围结构的细胞,通透性会相差很大并影响信号强弱。

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