DGGE

✍ dations ◷ 2024-07-05 03:03:17 #DGGE

温度梯度胶体电泳(temperature gradient gel electrophoresis, TGGE)是电泳技术的一种，通过物质在不同温度下性质的区别进行分离。TGGE是一种有效的分离DNA、RNA或者蛋白的手段。它利用了不同分子在温度改变下构象的差别进行分离。另外一种类似的技术是变性梯度胶体电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)，则是利用不同分子在不同浓度的变性剂的作用下失活实现的。具有相似长度的DNA用普通的凝胶电泳无法进行分离，但利用DGGE可以分离长度只有200~700bp的DNA片段，若长度超过700bp会造成检定效率的下降，但也有报导持相反意见，认为片段长度的影响不大。DGGE凝胶中的变性剂浓度在上样处最低，向后逐渐增高。电泳过程中，起初双链DNA以直线形状向正极移动。随着变性剂（如甲酰胺或尿素）浓度的增加，DNA中具有低G+C含量的序列的部分被打开，而高G+C含量的部分仍保持双链。这样，DNA分子形成端部的叉状或中间的环形（即DNA部分熔化），便不能继续向前移动而形成条带，如此便能将具有相似长度而序列有差异的DNA分子分离开。TGGE的原理和DGGE相似，但用温度梯度代替了变性梯度。梯度凝胶电泳的主要应用主要在两个领域： 1)突变的检定(mutation analysis) 利用DGGE和TGGE能够发现和分离一些微小的突变，因为突变有时候能明显改变分子变性所需的变性剂浓度/变性温度。 2)复杂细菌样品的多样性分析(diversity analysis of complex bacterial samples)此两种应用的主要区别在于检定片段数目上的差异。

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