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基因靶向
✍ dations ◷ 2025-04-25 02:09:25 #基因靶向
基因标的(英语:gene targeting,又称为基因标靶)是一种利用同源重组方法改变生物体某一内源基因的遗传学技术。这一技术可以用于删除某一基因、去除外显子或导入点突变,从而可以对此基因的功能进行研究。基因标的的效果可以是持续的,也可以是条件化的。例如,条件可以是生物体发育或整个生命过程中的一个特定时刻,或将效应限制在某一特定组织中。基因标的的优点在于可以应用于任何基因,无需考虑其大小和转录活性。基因标的技术是从20世纪80年代发展起来的,是建立在对同源重组不断了解的基础之上。首先是以酵母这种较为简单的真核模式生物为基础,来对相关技术进行研究。随着外源DNA导入酵母细胞方法的建立、标记基因有效选择的利用、同源重组转化子筛选系统的建立、载体同源序列DNA(靶标)双链断裂提高同源重组效率的利用,使得基因打靶技术逐渐成熟起来。而对于哺乳动物细胞,由于其基因组比酵母细胞要大且复杂,基因打靶的成功率很低。因此要将基因打靶技术应用于哺乳动物,还需要新的策略。1989年,利用胚胎干细胞,美国科学家马里奥·卡佩奇和奥利弗·史密斯与英国科学家马丁·埃文斯,将基因打靶技术成功地应用于小鼠;他们也因此获得了2007年诺贝尔生理学与医学奖。将外源DNA导入标靶细胞后,利用基因重组,将外源DNA与标靶细胞内染色体上同源DNA间进行重组,从而将外源DNA定点整合入标靶细胞基因组上某一确定的位点。对于不同的生物体,所使用的基因打靶的方法也不用。对于小鼠来说,大致的流程如下:修改后的方法还可用于其他哺乳动物,如牛、羊、猪等。基因标的技术还被用于一些植物,特别是小立碗藓的研究。
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