南京地铁2号线是南京地铁东西向的主干线路。2号线西起油坊桥站，东至经天路站，在新街口站与1号线换乘，在大行宫站与3号线，在元通站与10号线换乘。全线设车站26座，全长37.95公里。2010年5月28日与1号线南延线同日开通运营。
南京地铁2号线已建成段全长37.95公里，共设车站26座，其中地下17座、地面2座、高架7座。其中一期工程西起河西新城的油坊桥站，东至紫金山南麓的马群站，全长25.14公里，其中地下20.38公里、地面4.77公里。此后线路两次向东延伸，最终止于仙林大学城东端的经天路站，长12.68km，其中高架线约86.8％、地面线路（含下穿沪宁高速公路路基段涵洞）约13.2％。东延建设所需资金由仙林大学城承担。二号线在马群和油坊桥分别设车辆段和停车场各一座。二号线自西向东连接河西、莫愁湖、新街口、明故宫、孝陵卫、仙林大学城等南京市重要片区，并在新街口与1号线交汇换乘，在元通站与10号线交汇换乘，在油坊桥站与S3号线交汇换乘。
2号线自2010年5月28日上午10时起载客试运营。运营初期，首班车6时、末班车22时从两侧终点站对开，高峰行车间隔8分20秒，平峰和低谷行车间隔为10分钟。至2010年底，高峰行车间隔缩短到5分47秒；至2011年8月列车到齐，高峰行车间隔4分26秒，平峰行车间隔为7分钟，低谷行车间隔10分钟。
S6号线规划
12号线规划
2号线采用1号线相同的南京浦镇车辆厂和阿尔斯通合作生产的列车，并在1号线列车的基础上进行了技术升级。列车以红色为主色调，为6节编组A型车，采用4动2拖方式编组，单节载客量310人，整列载客量1860人。
运营初期，2号线上线16列车，此后每个月可新上线一列车，最终全线配备35列车。
2016年，地铁2号线增购14列车，以满足日益增长的客流需求。新车仍由中车南京浦镇车辆制造，车型改与南京地铁3号线现行列车相同，只是内饰、涂装等细节改为2号线的红色。2号线新车已于2017号年下半年投入服务。
2号线以红色为线路标志色，而车站内的站名大字壁为蓝底黑字，由南京书法家尉天池创作。站点的文化设计以传统节假日为主题展开，在主要车站设有主题文化墙，运用雕塑、壁画等多种艺术形式。以下是部分车站文化墙的主题：
苜蓿园站吊顶的织女，体现车站七夕节主题
大行宫站的春节文化墙
