姐妹城市是指将地域或政治上没有关联的城市联系起来，以期促进相互间的人员接触和文化联系，并且这样的联系并不局限于城市之间，在县、地区、州（省）和其他国家以下的行政区之间都可以进行。
佛罗里达州的各个司法管辖区经常通过国际姐妹城协会与他国城市结成伙伴关系，该组织的目标是“通过相互尊重、理解与合作促进和平”。各姐妹城市之间可以通过各种各样的活动互动，如医疗保健、教育、商业和艺术等。
除非另有说明，以下的列表中的信息都是根据国际姐妹城协会官方网站提供的信息汇编，以正字法和区域校正列出。姐妹城市的建立需要双方城市递交声明，并且在任何一方正式提出时就会解除这一关系。根据各方是否有所行动，伙伴关系可能是活跃或非活跃状态，也可以正式加以取消。下面的列表中列明了全部三种情况。例如：海厄利亚和马纳瓜，以及西迈阿密和莱昂就取消了伙伴关系，这主要是因为桑地诺政权统治期间双方的政治分歧。好莱坞和圣萨尔瓦多，以及博卡拉顿和斯潘道之间的伙伴关系则是因为一场针对萨尔瓦多内战的抗议活动而结束。年份有可能只是估计值，这种情况将在数字后面加上“~”来表示，列出的年份来源于媒体报道中首次提及这一关系的日期。
