顾光祖（1568年－1645年），字耀之，山东东昌府平山卫人，明朝、南明政治人物。
万历三十四年（1606年）举人，天启二年（1622年）成进士，授行人，负责册封瑞王朱常浩、惠王朱常润及桂王朱常瀛；转工科给事中，督理北京的厂库及建设陵墓物资，日以继夜釐剔。他对民兵立誓：“我自命生平清白直，不收受人民任何东西。你们的工价银饷，动辄需要五六万、八九万，我必不敢多发引致乏匮，也必不敢少发延缓病弱兵民，绝对不会如以前等候多年也得不到十分一。”魏国公徐弘基有事请托顾光祖，他严厉地说：“为朝廷效力矢在公正审慎，怎能接受暗中贿赂？”立刻纠察徐弘基，崇祯帝最初考虑重惩，但顾念魏国公是勋旧改为罚俸一年。徐弘基恨之不已，买通宦官诬陷其误收铅银，降为光禄寺丞，再陞尚宝司卿。其建言多获采纳，得准告老回乡。北京沦陷，他在家乡起兵；弘光帝继位，召任太仆少卿，升太常寺卿，转大理寺卿。卒年七十八。
