伍文定（1470年－1530年），字时泰，号松月，湖广承宣布政使司荆州府松滋县（今湖北省松滋市西北老城）人，明朝政治人物、军事将领，同进士出身。
伍文定强于弓马膂力，喜欢议论。弘治十二年（1499年）中进士，授常州府推官，善于决断案件，期间劝魏国公徐与退田于民，后因刘瑾接受徐与贿赂，巡抚艾朴等十四人悉数被逮捕，当时伍文定已经升至成都同知，也因此下诏狱，被贬斥为民。
刘瑾伏诛，伍文定重新起用，并平定江西姚源、王浩八等民乱，此后升为河南府知府，擒拿张勇、李文简叛乱。因政绩，调任吉安府知府，平定永丰及大茅山叛乱，此后辅佐巡抚王守仁平定桶冈、横水。
宁王朱宸濠称兵造反，吉安府官民争相逃亡，是为宁王之乱，伍文定斩杀一个逃亡者后，众人纷纷安定，并迎接赣南巡抚王阳明入城抗敌。此后知府邢珣、徐琏、戴德孺等纷纷前来共同讨伐，伍文定担任大帅。在战场上，伍文定身中矢石，火烧其须而不动。平定叛乱后，因功最大，升江西按察使。太监张忠、许泰抵达南昌，意图冒功，但王阳明已经俘虏朱宸濠抵达浙江。至此张忠大恨，伍文定反被捆绑，伍文定怒骂张忠是想帮宁王报仇，张忠听到指控颇惊，只好将他放了。之后，伍文定仍然升为广东右布政使，未赴任时，世宗已经嗣位。伍文定于是上疏称张忠、许泰罪过，并请发放朱宸濠赀财，奉还江西，并释放被张忠、许泰冤枉之人，明世宗对此表示嘉奖并批准。
此后论功，升任右副都御史，提督操江。嘉靖三年（1524年）讨平海贼董效，后因病请辞。嘉靖六年（年）召为兵部右侍郎，同年冬升任右都御史，掌管都察院事。次年，升任兵部尚书，提督云南、四川、贵州、湖广军，讨伐云南土酋安铨叛乱，并后因尚书方献夫、李承勋诋毁而令致仕。嘉靖九年（1530年）去世。天启初年（1621年）追谥忠襄。
