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酶联免疫吸附法
✍ dations ◷ 2025-04-24 18:43:22 #酶联免疫吸附法
酶联免疫吸附试验(又称酵素免疫分析法,Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),简称酶联法)利用抗原抗体之间专一性键结之特性,对检体进行检测;由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上的抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计其键结机制后,配合酵素呈色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用呈色的深浅进行定量分析。酶联法的一项重要应用为用于HIV检测,其检测的蛋白一般为HIV的p24蛋白 (P24 capsid protein(英语:P24 capsid protein))。根据待测样品与键结机制的不同,ELISA可设计出各种不同类型的检测方式,主要以三明治法(sandwich)、间接法(indirect)、以及竞争法(competitive)三种为主。三明治法常用于检测大分子抗原,一般之操作步骤为:三明治法分别以两种抗体对检体中的抗原进行两次专一性辨认,因此专一性相当高,但此待测抗原必须是多价抗原,如此才可获得两种以上的专一性抗体,以分别进行夹心;而且此法需要足够的表位空间以进行抗原抗体的夹心,所以并不适用于半抗原或小分子抗原等分子量较小之标的。间接法常用于检测抗体,一般之操作步骤为:竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为:当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原,或是不易得到足够的纯化抗体以固着于孔盘上时,一般会考虑使用竞争法ELISA。
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