NIH 3T3，亦称3T3，是一个由纽约大学医学院病理学系的乔治·托达洛（George Todaro）以及哈沃德·格林（Howard Green）两名研究人员于1962年构建的永生化细胞系。NIH 3T3细胞的来源是NIH瑞士小鼠（NIH Swiss mice）的胚胎成纤维细胞。其名称中的3T3指该细胞在建系过程中每3天传代（transfer）一次，每次接种3 x 105个细胞。在传代20-30次后，两名成功人员成功建立了今天的NIH 3T3细胞系。
3T3细胞由纽约大学医学院病理学系的两名学者乔治·托达洛（George Todaro）以及哈沃德·格林（Howard Green）于1962年构建。该细胞的来源是NIH瑞士小鼠（NIH Swiss mice）的胚胎成纤维细胞。他们构建细胞系时，在原代培养后，每3天传代（transfer）一次，并以3 x 105个细胞每20cm2的密度将细胞铺到新的组织培养皿中。在传代20-30次后，他们发现一部分成纤维细胞的生长速度开始加快，随后，即使再经过多次传代，这些细胞还是能继续生长分裂（即这些细胞已经跨越了海弗里克极限，进入了永生化状态）。他们在1963年报告了这一成果。随后，该细胞的名称前面加上了NIH（美国国立卫生研究院）的名字，称为NIH 3T3。
NIH 3T3细胞通常于添加10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中培养，根据情况可以向培养基中添加一定量的抗生素，以预防细菌污染。该细胞的细胞周期大约为18小时。传代时使用胰蛋白酶消化即可。NIH细胞为贴壁生长，有接触抑制现象。在显微镜下，可以观察到培养皿的NIH细胞呈梭形。
NIH 3T3细胞的转染效率较高，细胞生物学研究者常常将其选作研究模型。对NIH 3T3的基因组分析表明，NIH 3T3细胞为非整倍体，研究表明，NIH 3T3细胞的染色体数范围大致在52条到82条之间，大部分（超过70%）NIH 3T3细胞中含有70到78条染色体（正常二倍体小鼠的染色体数为40) 。
