克列诺片段

✍ dations ◷ 2025-06-28 04:13:00 #克列诺片段

克列诺片段（Klenow fragment）或称克列诺酶（Klenow enzyme），是汉斯·克列诺1970年用枯草杆菌蛋白酶（subtilisin）处理大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ时，得到的两个片段中分子量较大的一个，它含有605个氨基酸残基（324～928），并有大小两个结构域，其中大结构域（518～928）具有5'→3'聚合酶和3'→5'外切酶活性，小结构域（324～517）则具有5'→3'外切酶活性。在一些应用中，Klenow片段的3'→5' 核酸外切酶活性可能会干扰合成进行。于是可透过修改大肠杆菌Pol A基因(D355A，E357A)使其N端324个碱基移除并失去3'→5' 核酸外切酶活性而保留5'→3'聚合酶活性，这种形式的酶称为exo-Klenow片段。 exo-Klenow片段用于微阵列的一些萤光标记反应，也可用于序列末端加上dA和dT，这是将DNA衔接子(Adapter)连接到DNA片段的过程中的重要步骤，经常用于制备用于次世代定序(NGS)的DNA文库。

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