克列诺片段

✍ dations ◷ 2025-04-03 16:46:02 #克列诺片段
克列诺片段(Klenow fragment)或称克列诺酶(Klenow enzyme),是汉斯·克列诺1970年用枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)处理大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ时,得到的两个片段中分子量较大的一个,它含有605个氨基酸残基(324~928),并有大小两个结构域,其中大结构域(518~928)具有5'→3'聚合酶和3'→5'外切酶活性,小结构域(324~517)则具有5'→3'外切酶活性。在一些应用中,Klenow片段的3'→5' 核酸外切酶活性可能会干扰合成进行。于是可透过修改大肠杆菌Pol A基因(D355A,E357A)使其N端324个碱基移除并失去3'→5' 核酸外切酶活性而保留5'→3'聚合酶活性,这种形式的酶称为exo-Klenow片段。 exo-Klenow片段用于微阵列的一些萤光标记反应,也可用于序列末端加上dA和dT,这是将DNA衔接子(Adapter)连接到DNA片段的过程中的重要步骤,经常用于制备用于次世代定序(NGS)的DNA文库。

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