TA克隆

✍ dations ◷ 2025-06-28 06:37:04 #TA克隆
TA克隆(TA cloning)是一种免用限制酶的亚克隆手段,其操作不仅比传统的亚克隆简单,而且耗时也较短。TA克隆的关键在于载体和目的基因末端的腺嘌呤(A)和胸腺嘧啶(T)的互补配对。载体和目的基因进行上述配对之后,用DNA连接酶即可实现它们之间的共价连接。一般用PCR来制造目的基因。PCR中所用的Taq酶无3'-5'端外切活性,容易在3'端额外加上一个腺嘌呤(A)。因而PCR产物两条链3'端一般都多出一个腺嘌呤。如果PCR引物的5'端含有鸟嘌呤(G)的话,能使得3'端加上腺嘌呤的几率最大化。值得注意的是,制造用于TA克隆的目的基因的DNA聚合酶不能有3'-5'外切活性,否则产物的3'端不会多出一个额外的腺嘌呤。首先,将想要使用的载体用能产生平滑末端的限制酶线性化。之后,用末端转移酶在其末端加上一个2',3'-双脱氧三磷酸胸苷(ddTTP)。使用ddTTP才能确保只在末端加上一个胸腺嘧啶残基。胸腺嘧啶残基会被加到3'端上。一般市面上的TA克隆试剂盒中会附有一系列的可直接用于TA克隆(即3'端有一个额外的胸腺嘧啶)的载体。TA克隆中除了切开载体之外,都不需要使用限制酶,因而其操作相比传统亚克隆手段更简单快速。实验者也没有必要在设计引物的时候加上限制酶位点,因而节约了时间和金钱。另外,如果因为没有合适的酶切位点而无法进行传统的亚克隆时,TA克隆就可以作为一种替代方案。TA克隆的主要缺陷在于目的基因有50%的概率以相反方向被植入载体中。此外,通常情况中,TA克隆中的目的基因末端会多出一个腺嘌呤,而载体末端会多出一个胸腺嘧啶。

相关

  • 杜贝莱约阿希姆·杜·贝莱(英语:Joachim du Bellay, 1522年-1560年),文艺复兴时期欧洲诗人。他为七星诗社的成员,1549年发表最早的法语彼特拉克的十四行诗。其著作包括拉丁语诗歌和讽刺
  • 东斯拉夫人主要分布国家: 白俄罗斯、俄罗斯、乌克兰 次要分布国家:东斯拉夫人(白俄罗斯语:Усходнія славяне;俄语:Восточные славяне;乌克兰语:Східні
  • 维特里希库尔特·维特里希(德语:Kurt Wüthrich,1938年10月4日-),瑞士化学家,拥有中华人民共和国永久居留权。于开发出的对生物大分子的鉴定和结构分析的核磁共振方法的研究,与约翰·贝内特
  • 马及比县马及比县或马吉比县(英文:Margibi County)是利比里亚15县之一,首府卡卡塔。其下有四个区,全县土地面积约2,616平方千米(1,010平方英里)。 2008年人口普查显示当地有199,689人,是利比
  • 抗靶标在药物学中,一个抗靶标可以是一个受体,酶,或者其它生物靶标,当其和药物作用时会引起不希望的不良反应(副反应)。对于药物研发公司来说,在药物设计和开发过程中确保新药不和大量的被
  • 紧凑城市紧凑城市(英语:compact city)是在城市规划建设中主张以紧凑的城市形态来有效遏制城市蔓延,保护郊区开敞空间,减少能源消耗,并为人们创造多样化、充满活力的城市生活的规划理论。它
  • 侯赛因侯赛因·宾·塔拉勒(阿拉伯语:حسين بن طلال,Ḥusayn bin Ṭalāl;Hussein bin Talal,1935年11月14日-1999年2月7日),又称侯赛因一世(King Hussein I),为约旦国王,在位期间自19
  • 4th黄体制剂(英语:Progestin)是一种合成的孕激素,与孕酮有类似效果。Progestin的两种最重要用途为激素避孕(英语:Hormonal contraception)(独立或与雌激素一同使用)以及作为激素替代疗法
  • 本杰明·哈里森本杰明·哈里森(Benjamin Harrison,1833年8月20日-1901年3月13日),是美国第二十三任总统。其曾祖父本杰明·哈里森(五世)(英语:Benjamin Harrison V)为美国独立宣言签署人之一,祖父为威
  • 深海喷口海底热泉(hydrothermal vent)亦作海底热液系统(Submarine Hydrothermal System),是从海底喷出经由地热加热过的水及其裂缝喷发口。通常发现于火山活动频发、大陆板块移动的地区及