核酸酶保护分析

✍ dations ◷ 2025-08-01 02:41:24 #生物化学方法,遗传学,分子生物学技术

核酸酶保护分析(英语:Nuclease protection assay,亦称为核糖核酸酶保护测定)是一项用于生物化学与遗传学的实验室技术,可用以从细胞中提取出来混杂的RNA样本中鉴定出单独的RNA。此技术可以在即使总浓度很低的情况下鉴定一种或多种已知序列的RNA分子。被提取出来的RNA首先与反义RNA或DNA探针相混合,探针是与被研究的序列相互补的,接下来互补链相互杂交以形成双链RNA(或DNA-RNA杂交分子)。此混合物接下来接触核糖核酸酶,这种酶特异性地切割仅为链的RNA,但对双链RNA来说没有作用。当反应进行完全时,易受影响的RNA区域被降解为非常短的低聚物或单个核苷酸;存留下来的RNA片段是与之前所加进的反义链相互补的RNA,因此包含目的序列。

The probes are prepared by cloning part of the gene of interest in a vector under the control of any of the following promoters, SP6, T7 or T3. These promoters are recognized by DNA dependent RNA polymerases originally characterized from bacteriophages. The probes produced are radioactive as they are prepared by in vitro transcription using radioactive UTPs. Uncomplemented DNA or RNA is cleaved off by nucleases. When the probe is a DNA molecule, S1 nuclease is used; when the probe is RNA, any single-strand-specific ribonuclease can be used. Thus the surviving probe-mRNA complement is simply detected by autoradiography.

Nuclease protection assays are used to map 内含子s and 5' and 3' ends of transcribed 基因 regions. Quantitative results can be obtained regarding the amount of the target RNA present in the original cellular extract - if the target is a 信使RNA, this can indicate the level of 转录 of the gene in the cell.

They are also used to detect the presence of double stranded RNA, presence of which could mean RNA interference.

RNA印迹 is a laboratory technique that produces similar information. It is slower and less quantitative, but also produces accurate information about the of the target RNA. Nuclease protection assay products are limited to the size of the initial probes due to the destruction of the non-hybridized RNA during the nuclease digestion step.

相关

  • 甲状腺肿甲状腺肿(又称甲状腺肥大、大脖子病,粤语俗称大颈泡)指甲状腺发生肿胀,而此往往亦会引发颈部及声带肿胀。甲状腺一般重15至25克,然而肿大的甲状腺可成长至1千克。甲状腺肿大一般
  • 教宗教宗(拉丁语:Papa),或译教皇(华语圈外国家如韩国、日本、越南与部分教外人士目前仍沿用之),是罗马主教,同时为普世天主教会领袖与梵蒂冈城国国家元首,传统上被认为是圣伯多禄宗徒之位
  • 乙苯乙苯(英语:Ethylbenzene,分子式:C6H5CH2CH3)是一个芳香族的有机化合物,主要用途是在石油化学工业作为生产苯乙烯的中间体,所制成的苯乙烯一般被用来制备常用的塑料制品——聚苯乙烯
  • span class=chemf style=white-space:nowrap;Csub6/subH己烷,化学式C6H14,是烷烃中的第六个成员。己烷是常用的非极性具汽油味的有机溶剂,被广泛应用于色谱法中。正己烷作为良好的有机溶剂,被广泛使用在化工有机合成,机械设备表面清洗
  • 人类灭绝人类灭绝是未来学中经常出现的一个课题。人类之所以灭绝的可能原因有很多,可能是由于各类自然灾害或者是人类的行为本身。人类灭绝之后,地球的生态系统则会大幅重塑。不过其中
  • 侯增谦侯增谦(1961年6月-),中国矿床学家,中国地质科学院地质研究所所长,中国科学院院士。侯增谦1961年6月出生于河北省藁城县(今石家庄市藁城区),1978~1982年在河北地质学院(今河北地质大学)矿
  • span title=肌肉及骨骼系统 class=rt-commentedTextM/spanATC代码M(肌肉及骨骼系统)是解剖学治疗学及化学分类系统的一个分类,这是由世界卫生组织药物统计方法整合中心(The WHO Collaborating Centre for Drug Statistics Methodology)所
  • 光炮光炮(Phaser)是科幻创作星舰奇航记中出现的武器之一,又称相位枪、相位炮、死光枪,英文上是“相位能量重整”(PHASed Energy Rectification)的缩写,是一种星际联邦所辖星际舰队所使
  • 为黛茜小姐开车《为黛茜小姐开车》(英语:Driving Miss Daisy)是1989年华纳兄弟娱乐公司根据Alfred Uhry同名戏剧改编的电影,获第62届奥斯卡最佳影片奖,洁西卡·坦迪曾因此以80岁的高龄获得提名
  • 昆士兰自由国家党昆士兰自由国家党(英语:The Liberal National Party,缩写为LNP)是澳大利亚昆士兰州的一个保守主义政党,2008年由原澳大利亚自由党和澳大利亚国家党在昆士兰的党部合并组成。自由