递减聚合酶链式反应

✍ dations ◷ 2024-12-22 21:34:52 #递减聚合酶链式反应

递减PCR，亦称降落PCR（英语：touchdown PCR）是一种PCR（聚合酶链式反应）方法，用来避免非特异性序列的扩增。PCR中引物的黏合温度（annealing temperature）决定了黏合的特异性，温度越高特异性越强，但过高则不能实现引物和模板的结合，而过低会产生大量非特异性产物。因此进行PCR时需要寻找合适的黏合温度。递减PCR开始先设定一个比较高的黏合温度，每个循环黏合温度下降1℃，到一个较低温度以后每个循环的黏合温度保持不变直到结束。在刚下降到特异性结合可以进行的最高温度时，可以达到最高的特异性。这样在起初的几个循环中，特异性扩增序列可以相对非特异性序列多扩增若干倍，从而减轻非特异性扩增对结果的干扰。这种方法可用于省去多次试验最佳黏合温度的工作。此外，递减PCR还可与简并引物（degenerate primer）结合使用，用来推出一段已知肽链的氨基酸序列所对应的DNA碱基序列。

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