温度梯度凝胶电泳

✍ dations ◷ 2025-04-04 11:53:21 #生物化学方法,电泳,基因检测

温度梯度胶体电泳(temperature gradient gel electrophoresis, TGGE)是电泳技术的一种,通过物质在不同温度下性质的区别进行分离。

TGGE是一种有效的分离DNA、RNA或者蛋白的手段。它利用了不同分子在温度改变下构象的差别进行分离。另外一种类似的技术是变性梯度胶体电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE),则是利用不同分子在不同浓度的变性剂的作用下失活实现的。

具有相似长度的DNA用普通的凝胶电泳无法进行分离,但利用DGGE可以分离长度只有200~700bp的DNA片段,若长度超过700bp会造成检定效率的下降,但也有报导持相反意见,认为片段长度的影响不大。DGGE凝胶中的变性剂浓度在上样处最低,向后逐渐增高。电泳过程中,起初双链DNA以直线形状向正极移动。随着变性剂(如甲酰胺或尿素)浓度的增加,DNA中具有低G+C含量的序列的部分被打开,而高G+C含量的部分仍保持双链。这样,DNA分子形成端部的叉状或中间的环形(即DNA部分熔化),便不能继续向前移动而形成条带,如此便能将具有相似长度而序列有差异的DNA分子分离开。

TGGE的原理和DGGE相似,但用温度梯度代替了变性梯度。

梯度凝胶电泳的主要应用主要在两个领域:1)突变的检定(mutation analysis) 利用DGGE和TGGE能够发现和分离一些微小的突变,因为突变有时候能明显改变分子变性所需的变性剂浓度/变性温度。2)复杂细菌样品的多样性分析(diversity analysis of complex bacterial samples)

此两种应用的主要区别在于检定片段数目上的差异。

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