隔绝式恒温聚合酶连锁反应

✍ dations ◷ 2024-12-23 05:24:37 #聚合酶链式反应,DNA,恒温核酸复制反应

隔绝式恒温聚合酶连锁反应(insulated isothermal polymerase chain reaction, iiPCR)是一种在封闭毛细管内进行的聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction, PCR)。此技术自2010年起,由瑞基海洋生物科技股份有限公司(GeneReach Biotechnology Corp.)进行优化并开发一系列设备(商品名POCKIT)与试剂上市贩售。它的核心技术利用毛细管底部单一热源加热产生热对流,使局部反应溶液历经95°C(底部)到60°C(顶部)连续温度变化而完成核酸扩增复制反应。Krishnan等人在2002年描述毛细管内的Rayleigh-Benard式热对流可以完成PCR。随后出现几种形式描述局部历经不同温度完成PCR反应之论文。甚至也提供完成此类PCR反应之产品开发原型的发表,以及这类产品的应用。

利用底部加热方式,使毛细管内形成热对流循环。历经底部95°C到顶部60°C的变化,完成PCR所需要之denature,anneal, extension三个反应阶段(动画说明)。

进行iiPCR之引子设计规则与即时聚合酶链式反应real-time PCR相似, 包含:

在iiPCR反应中建议使用 TaqMan 萤光探针. 探针设计规则如下:

成功的 PCR 反应依赖优质引子,其中因素包含:

设计引子除以上规则外,还需注意以下事项:

虽然iiPCR的反应模式与real-time PCR相同,但是因为热对流循环无法和传统PCR生降温循环类比,因此无法进行定量检测. 开发以iiPCR技术进行检测需要先进行多数阳性控制组及阴性控制组反应前后萤光量比较.若以反应前萤光量为B(Before)而反应后萤光量为A(After),两者比值A/B可以呈现核酸扩增反应过程中释放萤光染剂相对量. 经过多数阳性/阴性控制组之A/B比对,可以定出统计上显著差异之阈值. 对于待鉴定的检体,若其A/B值大于阈值则可判定为阳性,反之则为阴性。

因iiPCR的单纯反应温度特性适合进行例行性检查,而非需时时调整反应参数之研究工作. 因此开发产品时以使用者进行最少操作步骤及最不易出错的方式设计.

相关

  • 行距在字体排印学,行距(Leading)指代字体连续行的基线间的距离。这个词起源于手工排版的年代,铅字之间通过插入铅块来增加垂直距离。这个术语仍然被应用于如 QuarkXPress(英语:QuarkXP
  • 坐骨神经痛坐骨神经痛(拉丁语:Sciatica),也被称为坐骨神经炎或腰椎神经根病变,它的症状是背部与腿部的疼痛。疼痛的范围上自背部,下至腿部的背侧、外侧、或正面。一般而言,症状只出现在身体的
  • 动物形态学动物学人类学 · 人与动物关系学 蜜蜂学 · 节肢动物学 医学节肢动物学 · 鲸类学 贝类学 · 昆虫学 动物行为学 · 蠕虫学 两栖爬行动物学 · 鱼类学 软体动物学 · 哺乳动
  • 安迪·葛洛夫安德鲁·史蒂芬·格罗夫(英语:Andrew Stephen Grove,1936年9月2日-2016年3月21日),原名安德拉什·伊什特万·格罗夫(匈牙利语:András István Gróf),昵称安迪·格罗夫(Andy Grove),又译
  • 水处理水处理(包括给水处理、污废水及雨水处理等)是指水经人为或自然现象,而改变其内容物成分变化的过程。人工的水处理可分为将自然界的水处理之后为人类使用,和将人使用过后的废水加
  • 荚状层积云荚状层积云(学名:Stratocumulus lenticularis,缩写: Sc len ),是层积云的一种,相对较为罕见。荚状层积云呈扁平的透镜或杏仁状,云体通常被拉得很长,且轮廓分明。荚状层积云可由许多
  • 第八第八航空队(英语:Eighth Air Force)是美国空军全球打击司令部下属的一个编号航空队,指挥部位于路易斯安那州的巴克斯代尔空军基地(英语:Barksdale Air Force Base)。
  • 等离激子学等离激子学(Plasmonics,台湾译为等离子体光学)是由美国加州理工学院应用物理及材料科学小组创立的。美国加州理工学院应用物理及材料科学小组, 用光波产生一种他们命名为Plasmo
  • 2017年11月逝世人物列表2017年11月逝世人物列表,是用于汇总2017年11月期间逝世人物的列表。
  • 性感的残酷《性感的残酷》(英语:The Sexy Brutale)是一款由骑士游戏工作室以及龙舌兰工作室(英语:Tequila Works)共同开发的冒险解谜游戏。游戏已经于2017年4月发行于PlayStation 4、Microso