隔绝式恒温聚合酶连锁反应

✍ dations ◷ 2025-11-04 10:52:59 #聚合酶链式反应,DNA,恒温核酸复制反应

隔绝式恒温聚合酶连锁反应(insulated isothermal polymerase chain reaction, iiPCR)是一种在封闭毛细管内进行的聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction, PCR)。此技术自2010年起,由瑞基海洋生物科技股份有限公司(GeneReach Biotechnology Corp.)进行优化并开发一系列设备(商品名POCKIT)与试剂上市贩售。它的核心技术利用毛细管底部单一热源加热产生热对流,使局部反应溶液历经95°C(底部)到60°C(顶部)连续温度变化而完成核酸扩增复制反应。Krishnan等人在2002年描述毛细管内的Rayleigh-Benard式热对流可以完成PCR。随后出现几种形式描述局部历经不同温度完成PCR反应之论文。甚至也提供完成此类PCR反应之产品开发原型的发表,以及这类产品的应用。

利用底部加热方式,使毛细管内形成热对流循环。历经底部95°C到顶部60°C的变化,完成PCR所需要之denature,anneal, extension三个反应阶段(动画说明)。

进行iiPCR之引子设计规则与即时聚合酶链式反应real-time PCR相似, 包含:

在iiPCR反应中建议使用 TaqMan 萤光探针. 探针设计规则如下:

成功的 PCR 反应依赖优质引子,其中因素包含:

设计引子除以上规则外,还需注意以下事项:

虽然iiPCR的反应模式与real-time PCR相同,但是因为热对流循环无法和传统PCR生降温循环类比,因此无法进行定量检测. 开发以iiPCR技术进行检测需要先进行多数阳性控制组及阴性控制组反应前后萤光量比较.若以反应前萤光量为B(Before)而反应后萤光量为A(After),两者比值A/B可以呈现核酸扩增反应过程中释放萤光染剂相对量. 经过多数阳性/阴性控制组之A/B比对,可以定出统计上显著差异之阈值. 对于待鉴定的检体,若其A/B值大于阈值则可判定为阳性,反之则为阴性。

因iiPCR的单纯反应温度特性适合进行例行性检查,而非需时时调整反应参数之研究工作. 因此开发产品时以使用者进行最少操作步骤及最不易出错的方式设计.

相关

  • 桑葚胚桑葚胚(拉丁文中的morus指的是桑葚的意思)是属于胚胎的早期发育,包含囊胚腔外围的细胞,包覆细胞外层的环带称为透明带。桑葚胚是合子胚胎分裂一直到32细胞时期,整个形状像一颗桑
  • Na+/K+ pump钠钾泵(也可称为钠钾-ATPase, Na+/K+-ATPase),是一种位于细胞膜上的酶(EC 3.6.3.9)(或说得更精确一点,离子匣式跨膜ATP酶)可在人类细胞及后生动物中发现。钠钾泵可以将细胞外相对细
  • 达芬奇外科手术系统达文西手术系统是一个由Intuitive Surgical设计和制造,使用微创手术方式来协助进行复杂手术的机器人外科手术系统。该系统需要一名以上外科医生在控制台来操纵。它常用于前列
  • 鄂霍次克板块鄂霍次克板块是一个大陆板块,范围涵盖了鄂霍次克海、堪察加半岛和日本东北部。在1968年勒皮雄首次提出的六大板块中,它是太平洋板块的一部分。后来这一地区被划至北美洲板块。
  • 清朝皇帝世系图肇祖原皇帝 ~ 兴祖直皇帝 ~ 景祖翼皇帝 ~ 显祖宣皇帝 ~ 成宗义皇帝(入关)太祖高皇帝[天命](立国) → 太宗文皇帝[天聪]太宗文皇帝[崇德](称帝) → 世祖章皇帝[顺治] → 圣祖仁皇帝[康熙] →
  • 阿文戈亚阿苯哥(Abengoa, S.A. 西班牙语发音:.mw-parser-output .IPA{font-family:"Charis SIL","Doulos SIL","Linux Libertine","Segoe UI","Lucida Sans Unicode","Code2000","Gent
  • 卢比孔行动克里普陀股份公司(英语:Crypto AG),是一家瑞士通讯密码设备公司,1952年的二战后改组设立,销售加密法设计服务和相关加密设备。该公司于1952年至1992年的四十年间受到美国中央情报
  • 超自然现象超自然(Supernatural)又称灵异现象,包含了超自然现象和超自然力量,即无科学根据而所谓在自然界的力量或现象。一旦超自然能够被证实,则它就不再是超自然了。超自然超出科学的范畴
  • 沙文主义沙文主义(法语:Chauvinisme ; 英语:Chauvinism)原指极端的、不合理的、过分的爱国主义或民族主义。有学者定义沙文主义为“认为自己的群体或人民优越于其他群体或人民的非理性
  • 四冲程循环四冲程循环(Four-stroke cycle),现在汽车以及工业用途的(汽车、卡车、发电机)内燃机中大多都是四冲程循环的。此技术由德国科学家尼古拉斯·奥托(Nicolaus Otto)于1876年发明,所以又