隔绝式恒温聚合酶连锁反应

✍ dations ◷ 2025-03-07 10:43:08 #聚合酶链式反应,DNA,恒温核酸复制反应

隔绝式恒温聚合酶连锁反应(insulated isothermal polymerase chain reaction, iiPCR)是一种在封闭毛细管内进行的聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction, PCR)。此技术自2010年起,由瑞基海洋生物科技股份有限公司(GeneReach Biotechnology Corp.)进行优化并开发一系列设备(商品名POCKIT)与试剂上市贩售。它的核心技术利用毛细管底部单一热源加热产生热对流,使局部反应溶液历经95°C(底部)到60°C(顶部)连续温度变化而完成核酸扩增复制反应。Krishnan等人在2002年描述毛细管内的Rayleigh-Benard式热对流可以完成PCR。随后出现几种形式描述局部历经不同温度完成PCR反应之论文。甚至也提供完成此类PCR反应之产品开发原型的发表,以及这类产品的应用。

利用底部加热方式,使毛细管内形成热对流循环。历经底部95°C到顶部60°C的变化,完成PCR所需要之denature,anneal, extension三个反应阶段(动画说明)。

进行iiPCR之引子设计规则与即时聚合酶链式反应real-time PCR相似, 包含:

在iiPCR反应中建议使用 TaqMan 萤光探针. 探针设计规则如下:

成功的 PCR 反应依赖优质引子,其中因素包含:

设计引子除以上规则外,还需注意以下事项:

虽然iiPCR的反应模式与real-time PCR相同,但是因为热对流循环无法和传统PCR生降温循环类比,因此无法进行定量检测. 开发以iiPCR技术进行检测需要先进行多数阳性控制组及阴性控制组反应前后萤光量比较.若以反应前萤光量为B(Before)而反应后萤光量为A(After),两者比值A/B可以呈现核酸扩增反应过程中释放萤光染剂相对量. 经过多数阳性/阴性控制组之A/B比对,可以定出统计上显著差异之阈值. 对于待鉴定的检体,若其A/B值大于阈值则可判定为阳性,反之则为阴性。

因iiPCR的单纯反应温度特性适合进行例行性检查,而非需时时调整反应参数之研究工作. 因此开发产品时以使用者进行最少操作步骤及最不易出错的方式设计.

相关

  • 下纲纲(英语:class,拉丁语:classis,复数:classes)是生物分类法中的一个分类级别,以及该级别中的分类法的分类单元。其他众所周知的级别按照大小降序排列是生物、域、界、门、科、属和物
  • 三裂动物三叶动物门(学名:Trilobozoa),又名三裂动物门,是一个已经完全灭绝的动物门,在分类上属辐射对称动物,身体呈特殊的三重辐射对称结构。三叶动物生存的年代非常久远,其化石仅出现于寒武
  • 上海博物馆上海博物馆是一座位于中国上海市的大型中国古代艺术博物馆,馆藏文物近102万件,其中珍贵文物14万件,尤以青铜器、陶器、瓷器、书法与绘画为特色。上海博物馆1950年筹建。1952年1
  • 望厦条约《望厦条约》,又称《中美五口贸易章程》、《中美望厦条约》,英文正式名称为《美利坚合众国与中华帝国之和平,友好,通商条约》(英语:Treaty of peace, amity, and commerce, betwee
  • 克拉伦斯·沃尔顿·李拉海克拉伦斯·沃尔顿·“沃尔特”·李拉海(英语:Clarence Walton "Walt" Lillehei,1918年10月23日-1999年7月5日),美国外科医生,心内直视手术的先驱开创者之一,被称作“心内直视手术之
  • ɒ开后圆唇元音(open back rounded vowel、low back rounded vowel)是母音的一种,用于一些口说语言当中,国际音标以⟨ɒ⟩代表此音,而X-SAMPA音标则以⟨Q⟩代表此音。⟨ɒ⟩这符号
  • 小青龙汤小青龙汤,出自《伤寒论》,主治外寒内饮证,症见恶寒发热,无汗,胸痞喘咳,痰多而稀。
  • 玉米粉玉米粉,亦作玉米面,可能指以下其中一项:
  • 慕残慕残(Acrotomophilia)是一种性嗜好,指一个人迷恋残疾人或热衷于变为残疾人,一般分为慕残者(英语:devotee),扮残者(英语:pretender)和自残者(英语:wannabe)。慕残者通常在少年时便出现对残
  • 同志偶像同志偶像(英语:Gay icon)是指被很多女同性恋者、男同性恋者、双性恋者、跨性别者(LGBT)群体支持的公众人物。一些主要的同志偶像的特质通常包括魅力、华丽、坚强面对逆境、以及双