隔绝式恒温聚合酶连锁反应

✍ dations ◷ 2025-12-05 03:18:15 #聚合酶链式反应,DNA,恒温核酸复制反应

隔绝式恒温聚合酶连锁反应(insulated isothermal polymerase chain reaction, iiPCR)是一种在封闭毛细管内进行的聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction, PCR)。此技术自2010年起,由瑞基海洋生物科技股份有限公司(GeneReach Biotechnology Corp.)进行优化并开发一系列设备(商品名POCKIT)与试剂上市贩售。它的核心技术利用毛细管底部单一热源加热产生热对流,使局部反应溶液历经95°C(底部)到60°C(顶部)连续温度变化而完成核酸扩增复制反应。Krishnan等人在2002年描述毛细管内的Rayleigh-Benard式热对流可以完成PCR。随后出现几种形式描述局部历经不同温度完成PCR反应之论文。甚至也提供完成此类PCR反应之产品开发原型的发表,以及这类产品的应用。

利用底部加热方式,使毛细管内形成热对流循环。历经底部95°C到顶部60°C的变化,完成PCR所需要之denature,anneal, extension三个反应阶段(动画说明)。

进行iiPCR之引子设计规则与即时聚合酶链式反应real-time PCR相似, 包含:

在iiPCR反应中建议使用 TaqMan 萤光探针. 探针设计规则如下:

成功的 PCR 反应依赖优质引子,其中因素包含:

设计引子除以上规则外,还需注意以下事项:

虽然iiPCR的反应模式与real-time PCR相同,但是因为热对流循环无法和传统PCR生降温循环类比,因此无法进行定量检测. 开发以iiPCR技术进行检测需要先进行多数阳性控制组及阴性控制组反应前后萤光量比较.若以反应前萤光量为B(Before)而反应后萤光量为A(After),两者比值A/B可以呈现核酸扩增反应过程中释放萤光染剂相对量. 经过多数阳性/阴性控制组之A/B比对,可以定出统计上显著差异之阈值. 对于待鉴定的检体,若其A/B值大于阈值则可判定为阳性,反之则为阴性。

因iiPCR的单纯反应温度特性适合进行例行性检查,而非需时时调整反应参数之研究工作. 因此开发产品时以使用者进行最少操作步骤及最不易出错的方式设计.

相关

  • 多重器官衰竭症候群多重器官衰竭(英语:Multiple organ failure)或称多器官功能障碍综合征(英语:Multiple organ dysfunction syndrome、MODS)、多系统器官衰竭(英语:Multiple-system organ failure)、多
  • 知识知识是对某个主题确信的认识,并且这些认识拥有潜在的能力为特定目的而使用。意指透过经验或联想,而能够熟悉进而了解某件事情;这种事实或状态就称为知识,其包括认识或了解某种科
  • ATP-柠檬酸裂合酶ATP-柠檬酸裂解酶(英语:ATP citrate lyase,又直接简称柠檬酸裂解酶)是脂肪酸生物合成中催化重要步骤的一个酶。该步在脂肪酸合成中发生,是因为ATP-柠檬酸裂解酶是糖代谢(产能)与产
  • 基本药物基本药物(Essential medicines)是世界卫生组织所定义的药物,是“满足最基础医疗需求”的药物,是所有人在有需要时都应该以合理的价格可以取得足够分量的药物。世界卫生组织订定
  • 厘升、公勺厘升,又称公勺(注音:ㄍㄨㄥ ㄕㄨㄛˋ),符号是cL(centiliter),是容积单位。厘升主要用于酿酒业,用来表示酒的容量。常见容量如下:厘升与其他容量及体积单位的转换如下:立方尧米、立方佑
  • 莫里斯·舍瓦利耶莫里斯·切瓦力亚(Maurice Chevalier,1888年9月12日-1972年1月1日),法国演员、法国音乐歌手、娱乐演员,在法国和美国进行表演。曾出演1957年影片《黄昏之恋》。1959年获得奥斯卡荣
  • 民防民事防护,简称民防,是一种由人民自行组成保护自己家园的编组;后来是由政府编组团队保护平民免遭战争、自然灾害等事故的行为。它包含一系列紧急措施,如预防、缓和、准备、回应、
  • γ-变形菌详见细菌分类表γ‐变形菌纲(学名:Gammaproteobacteria)属于细菌界变形菌门,是目前所知的细菌中种类最多的一纲,包括一些医学上和科学研究中很重要的类群,如肠杆菌科(Enterobactera
  • 特己醇特己醇是一种醇类的有机化合物,学名为2,2-二甲基丁醇(2,2-dimethylbutan-1-ol),其化学式为C6H14O。特己醇是一种易燃物,虽然不像其他碳数较少的醇类那么容易燃烧,但是它与空气混
  • 巴西中西部巴西中西部(葡萄牙语:Região Centro-Oeste do Brasil),是巴西的5个地理分区之一,包括戈亚斯州、马托格罗索州、南马托格罗索州及联邦区。总面积1,612,077.2平方公里。该地区总人