隔绝式恒温聚合酶连锁反应

✍ dations ◷ 2025-12-03 07:51:31 #聚合酶链式反应,DNA,恒温核酸复制反应

隔绝式恒温聚合酶连锁反应(insulated isothermal polymerase chain reaction, iiPCR)是一种在封闭毛细管内进行的聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction, PCR)。此技术自2010年起,由瑞基海洋生物科技股份有限公司(GeneReach Biotechnology Corp.)进行优化并开发一系列设备(商品名POCKIT)与试剂上市贩售。它的核心技术利用毛细管底部单一热源加热产生热对流,使局部反应溶液历经95°C(底部)到60°C(顶部)连续温度变化而完成核酸扩增复制反应。Krishnan等人在2002年描述毛细管内的Rayleigh-Benard式热对流可以完成PCR。随后出现几种形式描述局部历经不同温度完成PCR反应之论文。甚至也提供完成此类PCR反应之产品开发原型的发表,以及这类产品的应用。

利用底部加热方式,使毛细管内形成热对流循环。历经底部95°C到顶部60°C的变化,完成PCR所需要之denature,anneal, extension三个反应阶段(动画说明)。

进行iiPCR之引子设计规则与即时聚合酶链式反应real-time PCR相似, 包含:

在iiPCR反应中建议使用 TaqMan 萤光探针. 探针设计规则如下:

成功的 PCR 反应依赖优质引子,其中因素包含:

设计引子除以上规则外,还需注意以下事项:

虽然iiPCR的反应模式与real-time PCR相同,但是因为热对流循环无法和传统PCR生降温循环类比,因此无法进行定量检测. 开发以iiPCR技术进行检测需要先进行多数阳性控制组及阴性控制组反应前后萤光量比较.若以反应前萤光量为B(Before)而反应后萤光量为A(After),两者比值A/B可以呈现核酸扩增反应过程中释放萤光染剂相对量. 经过多数阳性/阴性控制组之A/B比对,可以定出统计上显著差异之阈值. 对于待鉴定的检体,若其A/B值大于阈值则可判定为阳性,反之则为阴性。

因iiPCR的单纯反应温度特性适合进行例行性检查,而非需时时调整反应参数之研究工作. 因此开发产品时以使用者进行最少操作步骤及最不易出错的方式设计.

相关

  • OO00-O08 流产结局的妊娠O10-O16 妊娠、分娩和产褥期的水肿、蛋白尿和高血压疾患O20-O29 主要与妊娠有关的其他孕产妇疾患O30-O48 与胎儿和羊膜腔及可能的分娩问题有关的孕产
  • 威廉·安德斯威廉·艾利森·安德斯(William Alison Anders,1933年10月17日-),曾是一位美国国家航空航天局的太空人,执行过阿波罗8号任务。任务期间,由于正赶上基督教圣诞节,安德斯带领其他宇航员
  • 开源硬件开源硬件,指与自由及开放源代码软件相同方式设计的计算机和电子硬件。开源硬件开始考虑对软件以外的领域开源,是开源文化的一部分。这个词主要是用来反映自由释放详细信息的硬
  • XSDXSD (XML Schema Definition)是W3C于2001年5月发布的推荐标准,指出如何形式描述XML文档的元素。XSD是许多XML Schema 语言中的一支。XSD是首先分离于XML本身的schema语言,故获
  • 行政院农业委员会林务局行政院农业委员会林务局(简称林务局)是中华民国林业事务的最高主管机关,为行政院农业委员会附属机关,主管全国森林、保安林的经营管理及自然生态保育等相关业务之推动及其政策、
  • 始鳄目始鳄目(学名:Eosuchia)又名杨氏蜥形目(Younginiformes),是已灭绝双孔类爬行动物的一目,生存在二叠纪晚期到三叠纪早期。本目的定义范围有些困难。在早期的分类历史中,本目曾经被当作
  • 真蕨亚纲真蕨亚纲(Polypodiidae)是链束植物纲里的一亚纲,包括所有的薄囊蕨类。本分类架构参考自2016年PPG I的论文:
  • 王继才王继才(1960年8月-2018年7月27日),江苏灌云人,江苏省连云港市灌云县开山岛民兵哨所前所长。开山岛位于江苏省东北部黄海海域,灌河入海口主航道南侧,距最近的陆地江苏陈家港约12海里
  • 加泰土丘加泰土丘(土耳其语:Çatalhöyük;土耳其语发音:.mw-parser-output .IPA{font-family:"Charis SIL","Doulos SIL","Linux Libertine","Segoe UI","Lucida Sans Unicode","Code20
  • 马克斯·英麦曼马克斯·英麦曼(德语:Max Immelmann,1890年9月21日-1916年6月18日)出生在德国德累斯顿,是一名第一次世界大战德国最早期的王牌飞行员。英麦曼在一次世界大战中击落敌机17架,与其战