隔绝式恒温聚合酶连锁反应

✍ dations ◷ 2025-07-19 06:40:41 #聚合酶链式反应,DNA,恒温核酸复制反应

隔绝式恒温聚合酶连锁反应(insulated isothermal polymerase chain reaction, iiPCR)是一种在封闭毛细管内进行的聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction, PCR)。此技术自2010年起,由瑞基海洋生物科技股份有限公司(GeneReach Biotechnology Corp.)进行优化并开发一系列设备(商品名POCKIT)与试剂上市贩售。它的核心技术利用毛细管底部单一热源加热产生热对流,使局部反应溶液历经95°C(底部)到60°C(顶部)连续温度变化而完成核酸扩增复制反应。Krishnan等人在2002年描述毛细管内的Rayleigh-Benard式热对流可以完成PCR。随后出现几种形式描述局部历经不同温度完成PCR反应之论文。甚至也提供完成此类PCR反应之产品开发原型的发表,以及这类产品的应用。

利用底部加热方式,使毛细管内形成热对流循环。历经底部95°C到顶部60°C的变化,完成PCR所需要之denature,anneal, extension三个反应阶段(动画说明)。

进行iiPCR之引子设计规则与即时聚合酶链式反应real-time PCR相似, 包含:

在iiPCR反应中建议使用 TaqMan 萤光探针. 探针设计规则如下:

成功的 PCR 反应依赖优质引子,其中因素包含:

设计引子除以上规则外,还需注意以下事项:

虽然iiPCR的反应模式与real-time PCR相同,但是因为热对流循环无法和传统PCR生降温循环类比,因此无法进行定量检测. 开发以iiPCR技术进行检测需要先进行多数阳性控制组及阴性控制组反应前后萤光量比较.若以反应前萤光量为B(Before)而反应后萤光量为A(After),两者比值A/B可以呈现核酸扩增反应过程中释放萤光染剂相对量. 经过多数阳性/阴性控制组之A/B比对,可以定出统计上显著差异之阈值. 对于待鉴定的检体,若其A/B值大于阈值则可判定为阳性,反之则为阴性。

因iiPCR的单纯反应温度特性适合进行例行性检查,而非需时时调整反应参数之研究工作. 因此开发产品时以使用者进行最少操作步骤及最不易出错的方式设计.

相关

  • 病因病原学又称为病因学是形成疾病的因素。因为不同性质的病原,大致上可以分成直接病因与助因两类。直接病因最常见的是创伤,或者是因为感染或辐射暴露导致的疾病。直接病因不一定
  • 氢氧化钡氢氧化钡是一种钡的化合物,分子式为Ba(OH)2,通常外观为白色颗粒状。氢氧化钡在分析化学中的滴定法可以当做弱酸的指示剂,对有机的弱酸别有效。它透明的溶液是不含碳酸盐的。不
  • 源代码源代码(英语:Source code),是指一系列人类可读的计算机语言指令。在现代程序语言中,源代码可以是以书籍或者磁带的形式出现;但最常用的格式是文本文件,这种典型格式的目的是为了编
  • NaSH硫氢化钠,化学式为NaHS,水溶液呈碱性。实验室中可通过无水乙醇钠与硫化氢反应制得硫氢化钠:硫氢化钠可用作多组分反应Asinger反应中的试剂,与α-卤代醛、氨和另一分子羰基化合物
  • 2010年俄罗斯森林大火2010年俄罗斯森林火灾指7月份以来,因干旱与持续高温导致多处森林着火而引发火灾,截至8月5日,俄罗斯全境已造成50人死亡。火灾产生的浓烟笼罩俄首都莫斯科,莫斯科城区白天的能见
  • 太阳鸟太阳鸟科,俗称玄凤(学名:Nectariniidae)是鸟纲雀形目中的一个科。主要生活在热带地区,以花蜜为食,有时也吃昆虫。为留鸟或短途候鸟。
  • 黄道周清人绘《黄道周官常服像》现藏于黄道周纪念馆黄道周(1585年3月9日-1646年4月20日),字幼玄(又作幼元、幼平),又字螭若、细遵,号石斋,谥忠烈,乾隆时改谥忠端,人称石斋先生,闽南、台湾尊称
  • 非洲猪瘟病毒非洲猪瘟病毒科(学名:Asfarviridae)是双链DNA病毒中的一个科。非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)是本科唯一的一个属,而与本科相关的Faustovirus(英语:Faustovirus)至今仍未分类。该类病毒主
  • 节目节目可以指:
  • 剑桥大学彼得学院剑桥大学彼得学院(英语:Peterhouse, Cambridge) 始建于1284年,是剑桥大学建立最早的学院。彼得学院现有284名本科生,130名研究生和45名院士,是剑桥大学最小的学院。彼得学院的建