Southern印迹法

✍ dations ◷ 2024-11-05 16:32:43 #Southern印迹法

Southern印迹法，南方吸渍分析（英语：Southern blot），是由英国生物学家Sir Edwin Southern于1975年发明，并因此得名（Southern为南方之意），是一种普及的分子生物学实验技术。目的是侦测经由胶体电泳分离的样品中，含有特定序列的脱氧核糖核酸片段。通常，先利用胶体电泳分离脱氧核糖核酸（DNA）样本中各种不同大小的分子。不同大小的分子在胶体电泳之后，会分离而散布在胶体上不同的位置。接着，这些DNA分子可以利用虹吸作用，转染到一个薄膜上，经由DNA变性使它们的双股分开。因为双股DNA已经固定在薄膜上，所以变性后无法再形成双股螺旋；然后将上述薄膜暴露在杂交探针（probe）里，让探针和DNA杂交（hybridize）。探针是会产生放射线、或可以放出颜色或萤光的物质标记的单股DNA或核糖核酸（RNA）片段；最后是观察结果。薄膜上可以侦测到放射性或者萤光讯号的位置，就是含有可以与探针核酸序列进行偶合的脱氧核糖核酸样本散布的位置。类似的技术也被用来侦测经由胶体电泳分离的样品中，含有特定序列的RNA片段，当应用在RNA的侦测时，被称为Northern印迹法。Southern杂交是利用标记的探针（probe）与转印膜上把DNA片段进行杂交的技术，检测DNA片段中是否存在与探针同源的序列。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针(序列已知)进行特异性的靶序列检测。这里介绍两种常用的转印方法：毛细转印和电转印法。早期Southern blot是使用毛细转印法，经虹吸作用，转移到NC(硝酸纤维)膜上。转印法经过改良后，快速简便的电转印法如今应用的更加普遍。杂交前封闭膜上非特异性杂交位点，减少其对探针的非特异吸附。盐浓度、温度、次数、体积阳离子尼龙膜

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